ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法，它的具体操作步骤及注意事项如下：

‍操　作　步　骤

1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。

2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。

3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。

4．分别于样品孔中加入10UL抗体。

5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。

6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。

9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。

10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。

11．保存结果，收拾桌面。

12．分析处理数据

1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。

2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。

4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。

5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。

6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。